| ◆ Adipocyte Contract Assay Services |
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● Differentiation Assays
脂肪細胞の成熟を刺激あるいは抑制する化合物の同定
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- 96ウェルフォーマット
- 化合物添加後、3, 7 or 14日間の処理が可能
- 分化あるいは脂質産生フェーズ中の化合物処理
- 総トリグリセリド蓄積の測定
- 分化阻害実験も可能
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● Lipolysis Assays
脂肪分解を促進あるいは阻害する化合物の同定
インスリンmimeticsの同定
- 96ウェルフォーマット
- 活性化および阻害のどちらのアッセイも可能
- Acute or chronicのアッセイが選択可
- 培地中に放出されたGlycerolおよび non-esterified fatty acid (非エステル化脂肪酸: NEFA)のいずれかあるいは両方の測定
- 化合物が試薬と干渉しないことの検証
- Positive Control: 1 μM Isoproterenol
- Vehicle Control: Appropriate concentration of all solvents
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Activation |
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Inhibition |
Comparable volumes of conditioned buffer were subjected to either the glycerol assay or non-esterified fatty acid assay to determine the extent of lipolysis. The concentration of glycerol and fatty acids released are shown on the graph below. A calculation for equivalents of glycerol corresponding to the fatty acid concentrations is included in the graph. There is good correlation in the 3 hour assay between glycerol release and fatty acid release. Additionally, we have determined that a glycerol concentration up to 0.5% has no effect on the fatty acid lipolysis assay. | |
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● Lipid Accumulation Assays
細胞分化に伴う脂肪蓄積の刺激または阻害する化合物の同定
- 総トリグリセリド量の定量
- Positive control: PPAR Gamma agonist (10μM) or Dexamethasone (1μM)
- Negative control: PPAR Gamma agonist (10μM) or Dexamethasone (1μM) + TNFα (5ng/ml)
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Accumulation of triglycerides in 2 week old adipocytes. Cells were exposed to a PPAR gamma agonist (PC), a PPAR gamma agonist plus TNF alpha (NC), vehicle (VC) or an unknown test compound for 3 days. At the end of three days treatments were removed. The cells were fed and allowed to accumulate lipid for a period of 14 days. At the end of 14 days cells were lysed and glycerol measured with the Zen-Bio glycerol reagent. | |
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● Glucose Uptake Assays
グルコース取込を制御する化合物の同定
インスリン増感薬の同定
インスリンアナログ／ mimeticsの同定
- 96ウェルフォーマット
- [3H]-deoxyglucosee取込の測定
- インスリン存在下あるいは非存在下でのグルコース取込の比較測定によりインスリン感受性の定量が可能
- Positive control: insulin (100 nM)
- Negative control: Cytochalasin B (10μM)
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Glucose uptake after a 2 hour treatment. Data is calculated as mean counts per well. The assay was done in subcutaneous human adipocytes at two weeks post-differentiation. | |
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● Gene Expression Assays
- ABI 9600 HT RT-PCR 装置による Taqman 法での遺伝子発現解析
- 単一チューブから96ウェルプレートや Low Density Array cardsも利用可能
- LDA cardを用いて単一遺伝子から380遺伝子 までの遺伝子発現解析に対応可能
- カスタマイズされた遺伝子発現研究
- Acute or chronicでの処理が選択可能
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● Cytokine Secretion / Protein Expression
- ELISA / multiplexを用いた可溶性の分泌タンパク質の解析
- Western Blot あるいはELISAを用いた細胞内タンパク質発現解析
- WesternあるいはELISAを用いたリン酸化タンパク質の定量によるシグナルパスウェイ解析
- カスタマイズされたタンパク質研究解析
- Acute or chronicでの処理が選択可能
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Adiponectin Secretion
Adiponectin secretion from human adipocytes in response to increa sing concentrations of a PPAR gamma agonist. Two different human adipocyte lots display similar adiponectin secretion responsiveness. Data are expressed as ng/m l. |
Adipokine Secretion
Several analytes from cultured human preadipocytes, adipocytes, or adipocytes treated with Rosiglitazone. Data are expressed as pg/ml. |
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◆ Pancreatic Islet
機能性が検証されたヒト膵島を用いて、インスリン分泌を増強する化合物（糖尿病治療薬）を同定
NEW Glucose Stimulated Insulin Secretion (GSIS) Assay
詳細は、サービス概要(pdf)をご覧ください。
- Validation
- Islet counting (Islet Equivalents – IEQs)
- Purity (dithizone staining at >70%)
- Viability (Flow cytometry: propidium iodide, CMFDA at >90%)
- Function (GSIS > 2-fold glucose response in culture)
- Assay Format
- ELISA による インスリン分泌の測定
- 24 or 96ウェルフォーマット
- 通常3~5ドナーでのテスト
- KCl、GLP-1、IBMXなどのコントロールの追加も可能
- Customized GSIS assay example
- Normal donors vs Diabetic donors-Type 2
- Age (young vs old donors)
- BMI
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◆ Skeletal Muscle Cell Assays
インスリン増感剤やmimeticsの同定
エネルギー利用における変化の評価 – glucose vs. fatty acids
- Glucose uptake (グルコース取込試験)
- Fatty acid oxidation (脂肪酸酸化試験)
- 24ウェルフォーマットでの[14C]-オレイン酸の酸化を測定
- エネルギー利用–脂肪燃焼の効率を変化させる化合物の同定
- Glycogen synthesis (グリコーゲン合成試験)
- [14C]-glucoseのglycogenへの取込を測定
- インスリン依存性、インスリン増感剤や類似物の同定に活用
- Glucose oxidation (グルコース酸化試験)
- 24ウェルフォーマットで[14C]-glucose の代謝を測定
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| ◆ Skin Cell Assays
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◆ Skin Models
- 3D epidermal skin model
- Neonatal keratinocyte stratification on membrane
- 皮膚刺激物質の同定
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- Human skin explants
- elective surgeryで得られた完全な厚みのヒト皮膚組織
- 14日間までのExplant培養
- 薬剤の皮膚細胞の proliferation、分化あるいは積層化に対する影響のhistology による同定
- ELISAによるタンパク質産生の測定
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◆ Antioxidant Activity Assays
ダイエットサプリメントや局所保護薬などとして使用される抗酸化活性物質の同定
- ORAC - oxygen radical absorbance capacity assay
- 96ウェルフォーマットでのin vitro kinetic 解析 (水素原子転移)
- サンプルの抗酸化活性を測定
- 親水性、親油性試験も可能
- ABTS or TEAC - trolox equivalent antioxidant capacity assay
- 96ウェルフォーマットでのin vitro分析(電子供与)
- サンプルの抗酸化活性を測定
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Effects of antioxidants in ORAC assay
Trolox, Sodium L-ascorbate, Epigallocatechin gallate (EGCG), and Gallic acid were tested for their antioxidant activity in the ORAC Antioxidant assay. |
Effects of antioxidants in ABTS assay
Trolox, Sodium L-ascorbate (L-Asc),Epigallocatechin gallate (EGCG), and Gallic acid (Gallic) were tested for their antioxidant activity in the ABTS antioxidant assay. | |
